IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421048

Übersicht

Ifnar2 kodiert die murine Interferon-α/β-Rezeptoruntereinheit IFN-α/βRβ (IFNAR2), eine zentrale Komponente des Typ-I-Interferonrezeptorkomplexes, der die extrazelluläre Bindung von IFN-α/β an die intrazelluläre JAK-STAT-Signalübertragung koppelt. Nach Rezeptorbindung wirkt IFNAR2 mit IFNAR1 zusammen, um TYK2 und JAK1 zu aktivieren, was die Phosphorylierung von STAT1/STAT2 und die Bildung von ISGF3 antreibt und so interferon-stimulierte Gene induziert, die die antivirale Abwehr, die Antigenpräsentation und die Programmierung angeborener Immunzellen regulieren. Dieser Signalweg prägt inflammatorische Ausgangsniveaus und die Wechselwirkung mit der NF-κB- und MAPK-Signalgebung und beeinflusst dadurch Zytokinnetzwerke und die Immunhomöostase. Eine fehlregulierte IFNAR2-abhängige Signalübertragung wurde mit immunvermittelter Pathologie sowie einer veränderten Anfälligkeit für Infektionen und Entzündungen in Verbindung gebracht, was IFNAR2 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in der Immunologie und der Wirt–Pathogen-Biologie macht.

Das IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ifnar2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ifnar2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ifnar2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFN-α/βRβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ifnar2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFN-α/βRβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ifnar2-Exone abzielen, die für die IFN-α/βRβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ifnar2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ifnar2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFN-α/βRβ HDR-Plasmid (m) und IFN-α/βRβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ifnar2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ifnar2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.