IFN-α/βRβ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403854-ACT

IFNAR2 kodiert die Interferon‑alpha/beta‑Rezeptoruntereinheit 2 (IFN‑α/βRβ), eine zentrale Komponente des Typ‑I‑Interferon‑Rezeptorkomplexes, der zelluläre Antworten auf IFN‑α und IFN‑β vermittelt. Die Ligandenbindung aktiviert eine JAK1/TYK2‑abhängige Signalübertragung sowie nachgeschaltete, durch STAT1/STAT2‑IRF9 (ISGF3) gesteuerte Transkriptionsprogramme und koordiniert damit antivirale Abwehr, Antigenpräsentation und die Regulation der angeborenen Immunantwort. IFNAR2‑abhängige Signalwege modulieren die Wechselwirkungen mit der NF‑κB‑ und MAPK‑Signalgebung und beeinflussen Zytokinnetzwerke, die die Aktivierung von Immunzellen und Gewebeentzündungen prägen. Eine veränderte IFNAR2‑Expression oder Signalgebungskapazität wird häufig im Zusammenhang mit dysregulierter Expression interferonstimulierter Gene, immunvermittelter Pathologie und Tumor‑Immun‑Interaktionen untersucht.

IFN-α/βRβ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFNAR2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IFN-α/βRβ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFNAR2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFNAR2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IFN-α/βRβ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFNAR2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IFN-α/βRβ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IFN-α/βRβ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFNAR2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.