IFN-α9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421045

Übersicht

Ifna9 kodiert das murine Interferon-α9 (IFN-α9), ein Typ-I-Interferon-Zytokin, das durch die angeborene Immunerkennung viraler und mikrobieller Nukleinsäuren induziert wird. IFN-α9 signalisiert über den IFNAR-Rezeptorkomplex und aktiviert JAK1/TYK2 sowie nachgeschaltet STAT1/STAT2‑IRF9 (ISGF3), wodurch die Transkription interferon-stimulierter Gene angestoßen wird, die die Pathogenreplikation einschränken und die Antigenpräsentation neu ausrichten. Dieser Signalweg moduliert die Aktivierung dendritischer Zellen, die Polarisierung von Makrophagen sowie T‑ und B‑Zellantworten und verknüpft IFN-α9 mit der Kontrolle von Entzündungen und der Immunhomöostase. Eine fehlregulierte Typ-I-Interferon-Signalgebung ist an chronisch-entzündlichen und autoimmunen Phänotypen beteiligt und trägt in Infektionsmodellen zur Immunpathologie bei, was Ifna9 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Maus-Systemen macht.

Das IFN-α9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ifna9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ifna9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ifna9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFN-α9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ifna9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFN-α9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ifna9-Exone abzielen, die für die IFN-α9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ifna9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFN-α9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IFN-α9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ifna9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFN-α9 HDR-Plasmid (m) und IFN-α9 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ifna9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ifna9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.