Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α7 (m): sc-421044

Présentation

Ifna7 code l’interféron‑α7 murin (IFN‑α7), une cytokine d’interféron de type I produite principalement en réponse aux virus et aux signaux de détection des acides nucléiques. IFN‑α7 se lie au complexe récepteur IFNAR pour activer la phosphorylation de STAT1/STAT2 dépendante de JAK1/TYK2, favorisant la formation du complexe transcriptionnel ISGF3 et l’induction de gènes stimulés par l’interféron, qui façonnent l’immunité innée et adaptative. Cet axe de signalisation recoupe les voies des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR), notamment les récepteurs TLR et de type RIG‑I, et influence la présentation de l’antigène, les réseaux de cytokines et les programmes de restriction antivirale. Une activité dérégulée des interférons de type I est impliquée dans des phénotypes inflammatoires et auto-immuns ainsi que dans les interactions tumeur–système immunitaire, ce qui fait d’Ifna7 un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie pilotée par les interférons.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifna7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifna7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifna7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFN-α7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifna7 pour l'étude de la signalisation de IFN-α7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifna7 essentiels à la fonction de IFN-α7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifna7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFN-α7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFN-α7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifna7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFN-α7 plasmide HDR (m) et le IFN-α7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifna7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifna7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.