Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IFITM3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403281-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IFITM3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IFITM3 Double-Nickase-Plasmid (h) und IFITM3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IFITM3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IFITM3: sc-100768
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IFITM3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403281-NIC | 20 µg | $410.00 |
IFITM3 (interferoninduziertes Transmembranprotein 3) ist ein durch Interferon induziertes, endolysosomales Membranprotein, das den Eintritt behüllter Viren einschränkt, indem es die Membranfusion begrenzt und den endozytotischen Transport moduliert. Seine Expression wird durch die Typ-I/II-Interferon-Signalgebung reguliert und trägt zu Programmen der angeborenen Immunabwehr bei, die während einer Infektion die Membranzusammensetzung und die Dynamik vesikulärer Prozesse umgestalten. IFITM3 wird zudem mit Entzündungsreaktionen in Verbindung gebracht und wurde aufgrund seiner Effekte auf Membranorganisation und Rezeptortransport auf Rollen in der Signalgebung von Immunzellen, in Stressantworten und in der Tumorbiologie untersucht. Genetische und expressionsbedingte Unterschiede in IFITM3 wurden mit Variabilität in Anfälligkeit und Schweregrad viraler Infektionsphänotypen assoziiert, was seine Relevanz für die Forschung zu Wirt-Pathogen-Interaktionen unterstreicht.
IFITM3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IFITM3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IFITM3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IFITM3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IFITM3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.