IFIT5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406044-ACT

ヒトIFIT5（interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5）は、インターフェロン刺激遺伝子（ISG）産物の一つであり、RNA種に結合することで自然免疫防御に関与します。特に5′三リン酸化されたウイルスRNAを選択的に認識し、下流の抗ウイルスシグナル伝達を形成します。IFIT5はI型インターフェロン応答に寄与するとともに、細胞内翻訳や炎症性遺伝子発現プログラムに影響を与えるRNA監視プロセスを調節します。これらの作用により、IFIT5は宿主—病原体相互作用や、慢性炎症、腫瘍関連の免疫シグナル伝達を含むインターフェロン駆動状態の文脈で広く研究されています。IFIT5発現の変化は、サイトカインネットワークやRNA代謝の表現型の変動と関連付けられており、免疫調節異常の機序研究において重要とされています。

IFIT5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFIT5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFIT5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFIT5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFIT5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFIT5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFIT5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFIT5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFIT5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFIT5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。