IFIT5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406044-ACT

Humanes IFIT5 (Interferon-induziertes Protein mit Tetratricopeptid-Repeats 5) ist ein Produkt eines durch Interferon stimulierten Gens, das an der angeborenen Immunabwehr beteiligt ist, indem es RNA-Spezies bindet – mit einer Präferenz für 5′-triphosphorylierte virale RNA – und nachgeschaltete antivirale Signalwege mitprägt. IFIT5 trägt zu Typ-I-Interferonantworten bei und moduliert Prozesse der RNA-Überwachung, die die zelluläre Translation sowie Programme der Expression entzündungsassoziierter Gene beeinflussen. Aufgrund dieser Funktionen wird IFIT5 häufig im Kontext von Wirt–Pathogen-Interaktionen und interferongetriebenen Zuständen untersucht, einschließlich chronischer Entzündung und tumorassoziierter Immunsignalgebung. Eine veränderte IFIT5-Expression wurde mit Änderungen in Zytokinnetzwerken und Phänotypen des RNA-Stoffwechsels in Verbindung gebracht, die für mechanistische Studien zur Immundysregulation relevant sind.

IFIT5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFIT5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IFIT5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFIT5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFIT5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IFIT5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFIT5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IFIT5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IFIT5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFIT5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.