IFIT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403830-ACT

テトラトリコペプチドリピートをもつインターフェロン誘導タンパク質2（IFIT2）は、ウイルス由来および細胞由来のRNAに結合し、翻訳や自然免疫シグナル伝達を調節する、インターフェロン刺激遺伝子（ISG）産物である。IFIT2はI型インターフェロンおよびJAK–STATによって駆動される抗ウイルスプログラムに関与し、炎症刺激下においてRNA代謝、ストレス応答、アポトーシス経路に影響を与える。IFIT2の発現異常は、感染や炎症に関連するさまざまな状況で観察されており、自己免疫疾患の生物学や腫瘍微小環境で報告されるインターフェロンシグネチャーの変化と関連づけられている。インターフェロン制御ネットワークの結節点として、IFIT2は自然免疫活性化の指標として、また宿主—病原体相互作用やサイトカイン駆動性の転写状態を解析するための機序解明ツールとして、しばしば用いられる。

IFIT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFIT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFIT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFIT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFIT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFIT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFIT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFIT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFIT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFIT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。