IFIT1 Double Nickase Plasmid (m): sc-421035-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IFIT1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IFIT1 Double-Nickase-Plasmid (m) und IFIT1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ifit1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IFIT1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFIT1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das interferoninduzierte Protein mit Tetratricopeptid-Wiederholungen 1 (IFIT1), kodiert durch das Mausgen *Ifit1*, ist ein zentraler, durch Interferon stimulierter Effektor, der die virale Replikation einschränkt, indem er fremde RNA-Merkmale wie fehlerhaft gekappte oder 5′-triphosphorylierte RNA erkennt und die Initiation der Translation begrenzt. IFIT1 wirkt innerhalb der angeborenen Immunantwort in Signalwegen nachgeschaltet von Typ‑I‑Interferon- und Pattern-Recognition-Rezeptor(PPR)-Signalwegen, einschließlich RIG‑I‑ähnlicher Rezeptoren und TLR-vermittelter antiviraler Antworten, und prägt während Infektion und Entzündung die transkriptionelle und translationale Landschaft. Veränderte *Ifit1*-Expression und die Aktivität der IFIT-Familie wurden mit fehlregulierten Interferon-Signaturen, der Anfälligkeit des Wirts gegenüber viralen Erregern sowie immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, was *Ifit1* zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse interferonabhängiger Genprogramme in Mausmodellen macht. Forschende untersuchen IFIT1 häufig in Kontexten wie zytokingetriebenen Stressantworten, der Aktivierung von Makrophagen und dendritischen Zellen sowie der Modulation der Antigenpräsentation und der Kommunikation zwischen Immunzellen.
IFIT1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ifit1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ifit1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ifit1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ifit1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.