IFI-44 Double Nickase Plasmid (m): sc-430287-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IFI-44 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IFI-44 Double-Nickase-Plasmid (m) und IFI-44 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ifi44 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IFI-44 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430287-NIC | 20 µg | $410.00 |
Interferon-induziertes Protein 44 (IFI-44), kodiert durch das murine Gen *Ifi44*, ist ein Produkt eines interferon-stimulierten Gens, das nachgeschaltet der Typ‑I‑Interferon-Signalgebung und der Aktivierung von Mustererkennungsrezeptoren während antiviraler und entzündlicher Antworten induziert wird. Die IFI‑44-Expression wird häufig als Ausleseparameter für die Aktivierung der angeborenen Immunantwort verwendet und steht mit der Regulation zellulärer Programme wie interferongetriebenen Transkriptionsnetzwerken und Wirts-Restriktionsmechanismen in Zusammenhang. Eine Fehlregulation von IFI‑44 und verwandten Signaturen interferon-stimulierter Gene wird in infektiösen und immunvermittelten Kontexten beobachtet, was seine Eignung zur Untersuchung der Biologie von Interferon-Signalwegen, von Aktivierungszuständen von Immunzellen und von entzündungsassoziierten molekularen Phänotypen unterstreicht. In Mausmodellsystemen hilft die gezielte Veränderung von *Ifi44*, Mechanismen der Interferon-Antwort und nachgeschaltete Effektorfunktionen in verschiedenen Geweben zu entschlüsseln.
IFI-44 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ifi44-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ifi44 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ifi44-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ifi44-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.