Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFI-35 (h): sc-406072

Présentation

IFI35 code IFI-35, une protéine stimulée par les interférons qui participe à la signalisation de l’immunité innée et à la modulation de l’expression des gènes inflammatoires. IFI-35 est associée aux réponses aux interférons de type I et il a été rapporté qu’elle interagit avec des protéines de régulation immunitaire, influençant des voies en aval de l’activation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR), telles que la signalisation des récepteurs de type RIG-I et des récepteurs Toll-like (TLR). Par le biais de ces réseaux, IFI35 contribue aux programmes de défense antivirale et peut affecter la production de cytokines, la présentation de l’antigène et, plus largement, l’état d’activation des cellules immunitaires. Une signalisation des interférons dérégulée et une expression altérée d’IFI35 ont été associées à des pathologies à médiation immunitaire et à des interactions tumeur–système immunitaire, ce qui souligne sa pertinence pour les études portant sur l’inflammation, la biologie des infections et l’immunologie des cancers.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFI-35 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IFI35 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IFI35, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IFI35 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFI-35.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IFI35 pour l'étude de la signalisation de IFI-35, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IFI35 essentiels à la fonction de IFI-35
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IFI35 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFI-35 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IFI-35 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IFI35. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFI-35 plasmide HDR (h) et le IFI-35 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IFI35 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IFI35 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.