IFI-16 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416568-ACT

Humanes IFI16 (IFI-16) ist ein nukleärer DNA-Sensor und ein interferoninduzierbares Protein, das die angeborene Immunüberwachung aberranter oder fremder Nukleinsäuren mitkoordiniert. IFI-16 ist an der STING-abhängigen Interferon-Signalgebung sowie an inflammasomassoziierten Antworten beteiligt und beeinflusst Transkriptionsprogramme, die mit antiviraler Abwehr, Zellzykluskontrolle und chromatinassoziierter Regulation verknüpft sind. Über Interaktionen mit der DNA-Schadensantwort und der Transkriptionsmaschinerie kann IFI-16 zelluläre Stressantworten und seneszenzassoziierte Signalwege modulieren. Eine fehlregulierte IFI16-Aktivität wurde mit inflammatorischer Signalgebung, Phänotypen der Viruseinschränkung und immunbezogenen Krankheitsmechanismen in Verbindung gebracht, was IFI16 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Nukleinsäure-Sensing und Crosstalk zwischen Interferon-Signalwegen macht.

IFI-16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFI16-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IFI-16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFI16-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFI16-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IFI-16-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFI16-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IFI-16-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IFI-16-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFI16-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.