IER2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407175-ACT

Immediate Early Response 2 (IER2) ist ein schnell induzierter Transkriptionsregulator, der daran beteiligt ist, extrazelluläre Stimuli mit nachgeschalteten Genexpressionsprogrammen zu koppeln. In menschlichen Zellen wurde IER2 mit MAPK/ERK-abhängiger Signalübertragung sowie mit umfassenderen Immediate-Early-Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die Zellmigration, Zytoskelett-Remodeling und kontextabhängige Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Eine veränderte IER2-Expression wurde in mehreren pathologischen Kontexten beschrieben, darunter in der Tumorbiologie, wo sie mit Veränderungen des invasiven Verhaltens und stressadaptiven transkriptionellen Zuständen assoziiert ist. Diese Eigenschaften machen IER2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um stimulusabhängige Regulationsschaltkreise und das zeitliche Muster der Transkription in krankheitsrelevanten Modellen zu untersuchen.

IER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IER2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IER2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IER2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IER2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IER2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IER2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IER2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IER2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.