IDH2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401417-NIC

IDH2は、ミトコンドリアに局在するNADP依存性イソクエン酸デヒドロゲナーゼをコードしており、イソクエン酸を酸化的脱炭酸してα-ケトグルタル酸へ変換すると同時にNADPHを産生します。この反応は、TCA（トリカルボン酸）回路、ミトコンドリアのレドックス恒常性、そしてNADPH依存性のグルタチオン系およびチオレドキシン系の維持を通じた抗酸化防御を支えます。IDH2活性は、細胞分化プログラムや酸化ストレス下での代謝適応にも影響し、IDH2機能の破綻はα-ケトグルタル酸代謝やエピジェネティック制御の異常と関連しています。腫瘍代謝物（オンコメタボライト）である2-ヒドロキシグルタル酸を産生する反復性IDH2変異は、DNAおよびヒストンのメチル化パターンの異常と関連しており、IDH2はがん代謝とミトコンドリアシグナル伝達を研究するうえで重要な結節点となっています。

IDH2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IDH2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IDH2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IDH2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IDH2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。