ICSBP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400774-ACT

ヒトIRF8は、インターフェロン・コンセンサス配列結合タンパク質（ICSBP）をコードする。ICSBPは造血系に限局して発現する転写因子で、IRFファミリーおよびETSファミリーのパートナーと協調し、骨髄系およびB細胞系統の分化規定、抗原提示、ならびにインターフェロン刺激遺伝子（ISG）プログラムの制御に関与する。ICSBPはインターフェロン、TLR、サイトカイン経路からのシグナルを統合し、マクロファージ活性化や樹状細胞分化を含む自然免疫・獲得免疫応答を形成する。IRF8活性の制御異常は、免疫細胞の発生異常、炎症性表現型、免疫介在性疾患への感受性と関連づけられており、血液悪性腫瘍の生物学的機序の文脈でもしばしば研究される。転写ネットワークの結節（ノード）として、IRF8は免疫恒常性を制御する遺伝子制御回路を解明するための扱いやすい切り口を提供する。

ICSBP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IRF8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ICSBP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IRF8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIRF8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ICSBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIRF8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるICSBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIRF8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるICSBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。