ICK Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406371-LAC

La intestinal cell kinase (ICK) è una protein-chinasi serina/treonina della famiglia CMGC che integra segnali in grado di controllare la progressione del ciclo cellulare, la biologia del ciglio primario e la dinamica del citoscheletro. ICK si localizza nel ciglio e nel corpo basale, dove regola il trasporto intraflagellare e la lunghezza ciliare, collegandosi così alla segnalazione di sviluppo dipendente da Hedgehog e al controllo della proliferazione. Un’alterata attività di ICK è stata associata a fenotipi legati alle ciliopatie e a disturbi dello sviluppo, e la disregolazione delle reti di segnalazione chinasiche che coinvolgono ICK è stata studiata in contesti di crescita e differenziazione aberranti. Di conseguenza, ICK è un bersaglio utile per analizzare vie guidate da chinasi che accoppiano la ciliogenesi a programmi trascrizionali e a transizioni dello stato cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale ICK (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ICK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ICK (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ICK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ICK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ICK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.