Plasmide CRISPR/Cas9 KO I-309 (m): sc-422834

Présentation

Ccl1 code pour la chimiokine CC I-309, un ligand sécrété qui transmet ses signaux principalement via CCR8 afin d’orienter la chimiotaxie et le positionnement des cellules immunitaires au sein des tissus inflammés. Chez la souris, CCL1 est produite par les lymphocytes T activés, les monocytes/macrophages et d’autres leucocytes, contribuant au trafic leucocytaire, à la coordination des réseaux de cytokines et à la régulation des microenvironnements inflammatoires. Cet axe recoupe des programmes inflammatoires liés à NF-κB et module les réponses immunitaires adaptatives en influençant la polarisation et le recrutement des lymphocytes T. Une altération de la signalisation Ccl1/CCR8 a été associée à des modèles d’inflammation allergique, de pathologies de type auto-immun et d’infiltration immunitaire associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques d’immunopathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO I-309 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine I-309.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl1 pour l'étude de la signalisation de I-309, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl1 essentiels à la fonction de I-309
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le I-309 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le I-309 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le I-309 plasmide HDR (m) et le I-309 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.