HYPB Double Nickase Plasmid (h): sc-402789-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HYPB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HYPB Double-Nickase-Plasmid (h) und HYPB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SETD2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HYPB Double Nickase Plasmid (h) | sc-402789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HYPB Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SETD2 (HYPB) kodiert eine Histonmethyltransferase mit SET-Domäne, die während der transkriptionellen Elongation die Trimethylierung von Lysin 36 am Histon H3 (H3K36me3) katalysiert und damit den Chromatinzustand mit der Aktivität der RNA-Polymerase II verknüpft. Diese Markierung hilft, kotranskriptionelle RNA-Prozessierung, Antworten auf Replikationsstress der DNA und die homologiegesteuerte Reparatur zu koordinieren, und trägt durch die Modulation der Chromatinzugänglichkeit zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität bei. SETD2 methyliert außerdem Nicht-Histon-Substrate, darunter α‑Tubulin und STAT1, wodurch es mit der Regulation des Zytoskeletts und interferoninduzierten Transkriptionsprogrammen in Verbindung steht. Eine Fehlregulation oder ein Verlust von SETD2-abhängigem H3K36me3 ist mit veränderten Spleißmustern, erhöhten Mutationsraten und epigenetischer Instabilität assoziiert, die in mehreren krebsrelevanten Kontexten beobachtet werden, was seine häufige Verwendung in mechanistischen Studien zu Chromatin- und DNA-Schadenswegen unterstützt.
HYPB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SETD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SETD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SETD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SETD2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.