HYAL2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405005-ACT

Das humane Gen **HYAL2** kodiert eine glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankerte Hyaluronidase, die am Umbau der extrazellulären Matrix beteiligt ist, indem sie die Depolymerisierung von Hyaluronan (HA) an der Zelloberfläche einleitet. Durch die Erzeugung intermediärer HA-Fragmente, die anschließend von anderen Hyaluronidasen weiterverarbeitet werden können, beeinflusst HYAL2 die Organisation der perizellulären Matrix, Zelladhäsion und Motilität und kann rezeptorvermittelte Signalwege modulieren, die mit der HA-Biologie verknüpft sind, wie etwa CD44- und RHAMM-assoziierte Signalwege. Ein veränderter HA-Umsatz und eine veränderte HYAL2-Aktivität wurden mit Veränderungen in Entzündungsprozessen und Gewebefibrose sowie mit Phänotypen des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, darunter Invasion und stromales Remodeling. Daher wird HYAL2 häufig in Kontexten untersucht, in denen Matrixdynamiken das Zellverhalten prägen, einschließlich Entwicklungsprozessen, Wundreaktionen und der krebsassoziierten Regulation der extrazellulären Matrix.

HYAL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HYAL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HYAL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HYAL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HYAL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HYAL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HYAL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HYAL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HYAL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HYAL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.