HXK III Plasmide Double Nickase (h): sc-403846-NIC

Il gene umano **HK3** codifica l’esochinasi 3 (HXK III), un enzima ATP-dipendente che fosforila il glucosio a glucosio-6-fosfato, impegnando il glucosio nel metabolismo intracellulare e collegando la disponibilità di nutrienti alla produzione di energia. Controllando l’ingresso nella glicolisi e fornendo substrati per la via dei pentoso fosfati e per la sintesi di glicogeno, HXK III contribuisce a modulare l’equilibrio redox cellulare e la capacità biosintetica. L’espressione di HK3 è arricchita nelle linee ematopoietiche e mieloidi, collegando la sua attività alla programmazione metabolica delle cellule immunitarie durante attivazione e differenziamento. Un’attività dell’esochinasi deregolata e un utilizzo alterato del glucosio sono spesso associati alla riprogrammazione metabolica osservata nel cancro e negli stati infiammatori, rendendo HK3 un nodo utile per studiare la bioenergetica rilevante per la malattia.

HXK III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HK3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HK3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HK3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HK3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.