Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) HXK III: sc-403846-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HXK III consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HXK III (h) y el plásmido de doble nickasa HXK III (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HK3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HXK III Anticuerpo (A-9): sc-74488
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HXK III | sc-403846-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HXK III | sc-403846-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano HK3 codifica la hexoquinasa 3 (HXK III), una enzima dependiente de ATP que fosforila la glucosa a glucosa-6-fosfato, comprometiendo la glucosa con el metabolismo intracelular y acoplando la disponibilidad de nutrientes a la producción de energía. Al controlar la entrada a la glucólisis y aportar sustratos para la vía de las pentosas fosfato y la síntesis de glucógeno, la HXK III ayuda a modular el equilibrio redox celular y la capacidad biosintética. La expresión de HK3 está enriquecida en linajes hematopoyéticos y mieloides, lo que vincula su actividad con la programación metabólica de las células inmunitarias durante la activación y la diferenciación. La actividad de hexoquinasa desregulada y la utilización alterada de glucosa se asocian con frecuencia a la reprogramación metabólica observada en el cáncer y en estados inflamatorios, lo que convierte a HK3 en un nodo útil para estudiar la bioenergética relevante para enfermedades.
HXK III El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HK3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HK3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HK3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HK3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.