Particules Lentivirales d'Activation (h) HXK II: sc-400611-LAC

Le gène humain **HK2** code l’hexokinase II (HXK II), une enzyme associée à la mitochondrie qui catalyse la phosphorylation du glucose en glucose-6-phosphate, dépendante de l’ATP, engageant ainsi le glucose dans la glycolyse et les voies anaboliques en aval. En reliant l’utilisation du glucose au métabolisme mitochondrial, HXK II soutient le flux glycolytique, l’entrée dans la voie des pentoses phosphates et les adaptations métaboliques en conditions d’hypoxie grâce à son intégration aux signalisations HIF‑1 et aux programmes régulés par l’axe PI3K–AKT–mTOR. L’activité de HK2 est fréquemment associée à la reprogrammation métabolique dans les états prolifératifs, où l’augmentation de la glycolyse et les modifications de l’homéostasie rédox influencent la survie cellulaire et la capacité biosynthétique. En conséquence, HK2/HXK II est largement utilisée comme nœud mécanistique pour étudier la détection du glucose, le couplage mitochondrie–métabolisme et des phénotypes métaboliques pertinents pour la maladie dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HXK II (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HK2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HXK II (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HXK II. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HK2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.