HXK II Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400611-NIC

O HK2 humano codifica a hexoquinase II (HXK II), uma enzima associada à mitocôndria que catalisa a fosforilação da glicose em glicose-6-fosfato dependente de ATP, comprometendo a glicose com a glicólise e a via das pentoses fosfato. Ao se acoplar a canais aniônicos dependentes de voltagem na membrana mitocondrial externa, a HXK II ajuda a coordenar a bioenergética celular, a homeostase redox e o fluxo metabólico sob condições variáveis de nutrientes e oxigênio. O HK2 é frequentemente estudado no contexto de reprogramação metabólica, em que alterações no controle glicolítico influenciam a proliferação, as respostas ao estresse e a adaptação à hipóxia. A atividade e a expressão desreguladas de HK2/HXK II têm sido implicadas em diversos modelos relevantes para doenças, incluindo o metabolismo do câncer e estados de resistência à insulina, tornando-o um alvo comum em estudos mecanísticos do processamento de glicose.

HXK II O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HK2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HK2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HK2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HK2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.