Plasmide Double Nickase (h) HXK II: sc-400611-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HXK II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HXK II Double Nickase (h) et le plasmide HXK II Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HXK II Antibody (B-8): sc-374091
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HXK II | sc-400611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HXK II | sc-400611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **HK2** code l’hexokinase II (**HXK II**), une enzyme associée aux mitochondries qui catalyse la phosphorylation du glucose en glucose-6-phosphate, dépendante de l’ATP, engageant ainsi le glucose dans la glycolyse et la voie des pentoses phosphates. En se couplant aux canaux anioniques voltage-dépendants de la membrane mitochondriale externe, **HXK II** contribue à coordonner la bioénergétique cellulaire, l’homéostasie redox et les flux métaboliques selon les conditions variables d’apport en nutriments et en oxygène. **HK2** est fréquemment étudié dans le cadre de la reprogrammation métabolique, où une régulation glycolytique altérée influence la prolifération, les réponses au stress et l’adaptation à l’hypoxie. Une activité et une expression dérégulées de **HK2/HXK II** ont été impliquées dans de multiples modèles pertinents pour les maladies, notamment le métabolisme tumoral et les états d’insulinorésistance, ce qui en fait une cible courante pour des études mécanistiques de la prise en charge du glucose.
HXK II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.