Huntingtin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401441-ACT

HTTはハンチンチン（huntingtin）をコードしており、ハンチンチンは細胞質および核に局在する大型タンパク質である。ハンチンチンは、小胞輸送、エンドサイトーシス、オートファジー、ならびに微小管依存的輸送に関与することで、神経細胞の恒常性維持を支える。また、タンパク質—タンパク質相互作用ネットワークを調整し、シグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）として機能することで、転写制御やシナプス機能にも影響を与える。ヒト細胞においてHTTはストレス応答およびプロテオスタシス経路にも関与し、ミトコンドリア機能や選択的カーゴ除去を細胞生存プログラムと結び付けている。プロテオスタシスや転写制御の変化を含むハンチンチン生物学の破綻は、神経変性に関連する経路の攪乱を研究するためのモデルとして広く用いられている。

Huntingtin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HTTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Huntingtin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HTT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHTT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Huntingtinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHTT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHuntingtin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHTT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHuntingtin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。