Plásmido Doble Nickase (h) HuC: sc-400172-NIC

ELAVL3 (HuC) es una proteína de unión a ARN enriquecida en neuronas que reconoce elementos ricos en AU en transcritos diana y regula la expresión génica posranscripcional mediante el control de la estabilidad, la localización y la traducción del ARNm. Contribuye a la diferenciación y el mantenimiento neuronales al moldear regulones de ARN vinculados a la función sináptica y a la dinámica del citoesqueleto, y se integra con vías más amplias de procesamiento de ARN, incluido el empalme alternativo y la biología de los gránulos de ARN sensibles al estrés. La actividad alterada de proteínas neuronales de unión a ARN y los programas transcriptómicos downstream se estudian con frecuencia en el contexto de mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, donde ELAVL3 sirve como marcador y nodo funcional en la regulación génica específica de neuronas. La investigación sobre ELAVL3 humano suele examinar cómo el control de ARN dependiente de HuC influye en la maduración neuronal, la excitabilidad y la vulnerabilidad ante el estrés celular.

HuC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELAVL3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELAVL3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELAVL3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELAVL3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.