HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418508

Übersicht

HSPA8 (HSC70) ist ein konstitutiv exprimiertes molekulares Chaperon der HSP70-Familie, das die Proteostase unterstützt, indem es die ATP-abhängige Faltung, Refaltung und das „Triage“-Management neu synthetisierter oder durch Stress geschädigter Proteine fördert. Es ist an Proteinqualitätskontrollwegen beteiligt, darunter die chaperon-vermittelte Autophagie über das lysosomale LAMP2A, Endozytose und das Uncoating von Clathrin, sowie die Regulation der Dynamik von Stressgranula, und beeinflusst damit zelluläre Antworten auf proteotoxischen und metabolischen Stress. Durch Interaktionen mit Co-Chaperonen und dem Ubiquitin–Proteasom-System trägt HSPA8 zur Steuerung des Proteinumsatzes, der Organellenhomöostase und der Robustheit von Signalwegen in unterschiedlichen Zelltypen bei. Eine Fehlregulation HSPA8-gekoppelter Chaperon-Netzwerke wurde mit der Biologie von Proteinaggregationen und veränderten Stressanpassungsprogrammen in Forschungszusammenhängen zu Neurodegeneration und Krebs in Verbindung gebracht.

Das HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HSPA8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HSPA8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HSPA8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSPA8/HSC70-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HSPA8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSPA8/HSC70-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HSPA8-Exone abzielen, die für die HSPA8/HSC70-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HSPA8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSPA8/HSC70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HSPA8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSPA8/HSC70 HDR-Plasmid (h) und HSPA8/HSC70 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HSPA8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HSPA8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.