Plásmido Doble Nickase (m) HSP90B1/HSP90 beta: sc-420980-NIC

Hsp90ab1 codifica la chaperona molecular citosólica HSP90 beta, que поддержa la proteostasis al promover el plegamiento, la estabilización y la maduración conformacional de un amplio repertorio de proteínas cliente, incluidas quinasas proteicas, receptores de hormonas esteroideas y adaptadores de señalización. Mediante ciclos de chaperonaje dependientes de ATP junto con cochaperonas, contribuye a las respuestas al estrés, al control de calidad proteica y al ensamblaje de complejos multiproteicos, interactuando con vías como MAPK/ERK, PI3K–AKT y la señalización inmunitaria innata. La actividad de HSP90 beta en ratón también se asocia con procesos de homeostasis celular, como la autofagia y el recambio proteasomal, que modulan las respuestas al choque térmico y al estrés oxidativo. La capacidad de chaperonaje desregulada se estudia con frecuencia en el contexto de la dependencia de la señalización oncogénica, el mal plegamiento proteico en enfermedades neurodegenerativas y los mecanismos de enfermedades inflamatorias, lo que convierte a Hsp90ab1 en un nodo útil para el análisis de vías.

HSP90B1/HSP90 beta El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hsp90ab1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hsp90ab1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hsp90ab1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hsp90ab1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.