HSP70-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-418088-LAC

HSPA1A kodiert das induzierbare molekulare Chaperon HSP70-1, eine zentrale Komponente der zellulären Hitzeschockantwort, die die Proteostase aufrechterhält, indem es die Faltung neu synthetisierter Proteine unterstützt, Aggregation verhindert und das Wiederfalten oder die Sortierung geschädigter Proteine fördert. HSP70-1 arbeitet mit Ko-Chaperonen sowie den Ubiquitin-Proteasom- und Autophagie-Signalwegen zusammen, um die Proteinkontrolle (Proteinqualitätskontrolle) bei oxidativem Stress, proteotoxischem Stress und Entzündung zu regulieren. Durch die Modulation von Stress-Signalwegen, Apoptose und Antigenprozessierung beeinflusst die Aktivität von HSPA1A die zelluläre Anpassung in Kontexten wie Neurodegeneration, ischämischer Schädigung und onkogenem Stress, ohne dass damit ein klinischer Nutzen impliziert ist. Seine schnelle Induzierbarkeit macht es zudem zu einem nützlichen Readout und Regulator in Studien zu Stressgranula, Crosstalk mit ER-Stress und zytoprotektiven Signalwegen.

HSP70-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HSPA1A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HSP70-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HSPA1A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HSP70-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HSPA1A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.