Plasmide Double Nickase (h) HSP70-1: sc-418088-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HSP70-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HSP70-1 Double Nickase (h) et le plasmide HSP70-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSPA1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HSP70 Antibody (F-3): sc-373867
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HSP70-1 | sc-418088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HSP70-1 | sc-418088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA1A code la protéine humaine de choc thermique HSP70-1, un chaperon moléculaire dépendant de l’ATP qui favorise la protéostasie en aidant au repliement des polypeptides naissants, en empêchant l’agrégation et en facilitant le repliement ou la dégradation des protéines endommagées par le stress. HSP70-1 agit dans le cadre de la réponse cellulaire au choc thermique, en coordination avec HSF1 et des co-chaperons tels que DNAJ/HSP40 et les protéines de la famille BAG, et influence les mécanismes de contrôle qualité liés au système ubiquitine–protéasome et à l’autophagie. En modulant l’homéostasie protéique, la présentation antigénique et la signalisation du stress, HSP70-1 est impliquée dans un large éventail de situations caractérisées par un stress protéotoxique, notamment la neurodégénérescence, la survie des cellules cancéreuses en condition de stress et les états inflammatoires.
HSP70-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.