Plásmido Doble Nickase (h) HSP 60: sc-400336-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HSP 60 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HSP 60 (h) y el plásmido de doble nickasa HSP 60 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSPD1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HSP 60 Anticuerpo (LK1): sc-59567
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HSP 60 | sc-400336-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HSP 60 | sc-400336-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPD1 codifica la chaperonina mitocondrial HSP60 (HSPD1), un componente central del sistema de chaperoninas que favorece el plegamiento y el ensamblaje dependientes de ATP de proteínas mitocondriales importadas. Al mantener la proteostasis en la matriz mitocondrial, HSP60 influye en la fosforilación oxidativa, la biogénesis mitocondrial y las respuestas celulares al estrés, y puede modular la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas mitocondrial. La alteración de HSPD1 afecta el metabolismo mitocondrial, el manejo de especies reactivas de oxígeno y vías relacionadas con la apoptosis, vinculando la función o expresión alteradas de HSP60 con la neurodegeneración, fenotipos inflamatorios y la remodelación metabólica asociada al cáncer. Como chaperona altamente conservada, HSP60 también es relevante para estudiar el control de calidad mitocondrial y el estrés proteotóxico en diversos contextos experimentales.
HSP 60 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSPD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSPD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSPD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSPD1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.