HSP 60 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400336

Übersicht

HSPD1 kodiert das mitochondriale Chaperonin HSP60, eine zentrale Komponente des Chaperonin-Systems, das die Faltung und Assemblierung nukleär kodierter Proteine fördert, die in die mitochondriale Matrix importiert werden. HSP60 unterstützt die mitochondriale Proteostase, die Leistungsfähigkeit der oxidativen Phosphorylierung und Stressantworten, indem es Proteinfehlfaltung abpuffert und proteotoxische Schäden begrenzt. Eine Störung von HSPD1 beeinträchtigt die mitochondriale Qualitätskontrolle und kann die Anfälligkeit für Apoptose, die Redoxhomöostase sowie die mit mitochondrialer Dysfunktion verknüpfte angeborene Immun-Signalgebung verändern. Eine dysregulierte Expression oder Lokalisation von HSP60 wurde mit Neurodegeneration, kardiometabolischen Erkrankungen und krebsassoziierter Stressanpassung in Verbindung gebracht, was es zu einem wichtigen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der mitochondrialen Signalübertragung macht.

Das HSP 60 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HSPD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HSPD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HSPD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSP 60-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HSPD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSP 60-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HSPD1-Exone abzielen, die für die HSP 60-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HSPD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSP 60 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSP 60 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HSPD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSP 60 HDR-Plasmid (h) und HSP 60 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HSPD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HSPD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.