Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSP 56 Double Nickase Plasmid (h): sc-403455-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP 56 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP 56 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP 56 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FKBP4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP 56: sc-100758
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP 56 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403455-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 56 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403455-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FKBP4 kodiert das Immunophilin FKBP52 (HSP56), einen Cochaperon mit TPR-Domäne, der mit HSP90-Komplexen assoziiert und die Faltung, Stabilität und den Transport von Client-Proteinen reguliert. Am bekanntesten ist FKBP4 dafür, die Reifung von Steroidhormonrezeptoren und deren nukleäre Translokation zu modulieren, wodurch Chaperon-Aktivität mit Signalwegen des Androgen-, Glukokortikoid- und Progesteronrezeptors verknüpft wird. FKBP4 interagiert außerdem mit der zytoskelettalen Transportmaschinerie und kann über Proteostase-Netzwerke zelluläre Stressantworten beeinflussen. Eine dysregulierte FKBP4/HSP90-Cochaperon-Funktion wurde mit veränderter Hormonsignalisierung und gestörter Proteinhomöostase in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie und in der Neurodegenerationsforschung beobachtet werden.
HSP 56 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FKBP4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FKBP4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FKBP4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FKBP4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.