HSP 40 Double Nickase Plasmid (h): sc-402810-NIC

DNAJB1 kodiert das humane HSP40‑Co‑Chaperon, das den ATPase‑Zyklus von HSP70 reguliert und während proteotoxischem Stress die Proteinfaltung, das Refolding sowie die Sortierung fehlgefalteter Klientenproteine unterstützt. Über die durch die J‑Domäne vermittelte Stimulation von HSP70 trägt HSP40 zu zytosolischen Proteostase‑Netzwerken bei, die mit der Unfolded‑Protein‑Response, der Hitzeschock‑Signalgebung sowie der ubiquitin‑proteasomalen und autophagie‑vermittelten Qualitätskontrolle verknüpft sind. Die Aktivität von DNAJB1 beeinflusst die Reifung und Stabilität vielfältiger Signalproteine und verbindet damit Chaperon‑Kapazität mit Zellzyklus‑Kontrolle und stressadaptiven Transkriptionsprogrammen. Eine veränderte Chaperonfunktion oder eine dysregulierte DNAJB1‑Expression wurde mit einem Ungleichgewicht der Proteostase und krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Neurodegeneration und Kontexte onkogenen Stresses, was DNAJB1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Protein‑Homöostase macht.

HSP 40 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNAJB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNAJB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNAJB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNAJB1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.