Plásmido Doble Nickase (h) HSP 27: sc-400285-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HSP 27 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HSP 27 (h) y el plásmido de doble nickasa HSP 27 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSPB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HSP 27 Anticuerpo (F-4): sc-13132
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HSP 27 | sc-400285-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HSP 27 | sc-400285-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPB1 codifica la pequeña proteína de choque térmico HSP27, una chaperona molecular independiente de ATP que estabiliza proteínas desplegadas, favorece la proteostasis y modula la dinámica del citoesqueleto mediante interacciones con actina y filamentos intermedios. HSP27 se induce por estrés celular a través de la señalización del factor de choque térmico y participa en respuestas al estrés oxidativo, la regulación de la apoptosis y el control de la agregación proteica. A través de estas funciones, HSPB1 influye en vías vinculadas a la inflamación, la supervivencia celular y la remodelación adaptativa al estrés, lo que la hace relevante para estudios de neurodegeneración, lesión cardiovascular por estrés y tolerancia al estrés en células cancerosas. La alteración de la expresión de HSPB1 o de su estado de fosforilación se ha asociado con cambios en la estabilidad del proteoma y en las salidas de señalización por estrés en múltiples contextos patológicos.
HSP 27 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSPB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSPB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSPB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSPB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.