Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSP 27 Double Nickase Plasmid (h): sc-400285-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP 27 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP 27 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP 27 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP 27: sc-13132
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP 27 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400285-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 27 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400285-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPB1 kodiert das kleine Hitzeschockprotein HSP 27, ein ATP-unabhängiges molekulares Chaperon, das ungefaltete Proteine stabilisiert, die Proteostase unterstützt und über Interaktionen mit Aktin und Intermediärfilamenten die Zytoskelettdynamik moduliert. HSP 27 wird durch zellulären Stress über Heat-Shock-Faktor-Signalwege induziert und ist an oxidativen Stressantworten, der Regulation der Apoptose und der Kontrolle von Proteinaggregation beteiligt. Über diese Funktionen beeinflusst HSPB1 Signalwege, die mit Entzündung, Zellüberleben und stressadaptivem Remodeling verknüpft sind, und ist damit relevant für Studien zu Neurodegeneration, kardiovaskulären Stressverletzungen und der Stresstoleranz von Krebszellen. Eine veränderte HSPB1-Expression oder ein veränderter Phosphorylierungsstatus wurde in mehreren Krankheitskontexten mit Änderungen der Proteomstabilität und der Stress-Signalausgabe in Verbindung gebracht.
HSP 27 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.