HSP 27 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400285-ACT

HSPB1 kodiert das Hitzeschockprotein 27 (HSP27), ein kleines Hitzeschock-Chaperon, das ungefaltete Proteine stabilisiert und während zellulären Stresses die Proteostase unterstützt. HSP27 moduliert die Dynamik des Aktin-Zytoskeletts, reguliert apoptotische Signalwege und trägt über stressaktivierte Kinase-Netzwerke einschließlich MAPK/p38-Signalwegen zu Redox- und Entzündungsreaktionen bei. Über seine phosphorylierungsabhängige Oligomerisierung und die Interaktion mit Client-Proteinen beeinflusst HSP27 Zellüberleben, Migration und die Biologie von Stressgranula. Eine dysregulierte Expression oder Funktion von HSPB1 wurde mit der Stressanpassung von Krebszellen, neurodegenerativen Prozessen und Modellen kardiometabolischer Schädigung in Verbindung gebracht, was es zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für Studien zu Signalwegen und Mechanismen macht.

HSP 27 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HSPB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HSP 27 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HSPB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HSPB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HSP 27-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HSPB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HSP 27-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HSP 27-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HSPB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.