Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSP 20: sc-403164-ACT

HSPB6 code la petite protéine de choc thermique HSP 20, une chaperonne moléculaire induite par le stress qui module le repliement des protéines, la dynamique du cytosquelette et la protéostasie. Dans le muscle lisse et les types cellulaires cardiovasculaires, HSP 20 participe à des programmes de signalisation liés aux voies cAMP/PKA et monoxyde d’azote–cGMP, avec des effets dépendants de la phosphorylation sur le remodelage de l’actine et le tonus contractile. HSP 20 intervient également dans l’apoptose et les réponses au stress oxydant, influençant la survie cellulaire dans des conditions protéotoxiques et inflammatoires. Une expression ou une signalisation dérégulée de HSPB6 a été associée à une réactivité vasculaire altérée, à l’adaptation des cardiomyocytes au stress et à un dysfonctionnement du muscle lisse, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie cardiovasculaire et des voies aériennes.

HSP 20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSPB6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSP 20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSPB6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSPB6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSP 20. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSPB6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSP 20 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSP 20 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSPB6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.