HSFY1 Double Nickase Plasmid (h): sc-417414-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSFY1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSFY1 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSFY1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSFY1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSFY1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417414-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSFY1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417414-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSFY1 (Heat-Shock-Transkriptionsfaktor, Y-chromosomal 1) kodiert ein Y-Chromosom-assoziiertes Mitglied der Heat-Shock-Faktor-Familie, das an Transkriptionsregulationsprogrammen beteiligt ist, die die zelluläre Proteostase unterstützen. Obwohl HSFY1 weniger gut charakterisiert ist als die kanonischen HSFs, wird es mit stressresponsiver Genexpression, der Aufrechterhaltung der Proteinfaltungs-Homöostase und Qualitätskontrollwegen in Verbindung gebracht, die Chaperon-Netzwerke und die Anpassung an proteotoxische Bedingungen koordinieren. Die Expression und genetische Variation von HSFY1 wurden im Kontext der männlichen Keimbahnbiologie untersucht; dabei wurden Zusammenhänge mit gestörter Spermatogenese und Y-chromosomal gekoppelten Infertilitätsphänotypen berichtet. Als transkriptioneller Regulator bietet HSFY1 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie geschlechtsgebundene Regulatorfaktoren Stresssignale und den Zustand reproduktiver Zellen modulieren.
HSFY1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSFY1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSFY1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSFY1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSFY1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.