Plasmide CRISPR d'Activation (h) HS6ST1: sc-405111-ACT

Le gène humain **HS6ST1** code l’héparane sulfate 6-O-sulfotransférase 1, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui ajoute des groupements sulfate en position 6-O sur des résidus de glucosamine au cours de la biosynthèse des protéoglycanes à héparane sulfate. Ce profil de sulfatation contribue à déterminer la liaison des ligands et la formation de gradients pour de nombreuses voies de signalisation dépendantes de l’héparane sulfate, notamment les processus liés à **FGF/FGFR**, **WNT** et **BMP/hedgehog**, qui régulent la prolifération, la migration et la différenciation cellulaires. En modulant les interactions avec la matrice extracellulaire et l’activation des récepteurs, HS6ST1 influence les programmes de développement et la mise en place des tissus, et des altérations de la sulfatation de l’héparane sulfate ont été associées à une signalisation dérégulée dans divers contextes de maladies humaines. HS6ST1 est donc largement utilisé dans les études de glycobiologie, de transduction du signal et de comportements cellulaires gouvernés par la matrice.

HS6ST1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HS6ST1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HS6ST1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HS6ST1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HS6ST1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HS6ST1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HS6ST1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HS6ST1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HS6ST1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HS6ST1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.