Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HRF Double Nickase Plasmid (h): sc-402606-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HRF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HRF Double-Nickase-Plasmid (h) und HRF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TPT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HRF: sc-133131
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HRF Double Nickase Plasmid (h) | sc-402606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HRF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane TPT1 kodiert den Histamin-freisetzenden Faktor (HRF), ein hochkonserviertes zytosolisches Protein, das mit Zellwachstum, Stressanpassung und überlebensfördernden Signalwegen in Verbindung gebracht wird. HRF ist an Prozessen beteiligt, die mit der Kontrolle der Translation und der Proteostase verknüpft sind, und wurde mit der Modulation der Apoptose sowie zellulären Reaktionen auf oxidative und entzündliche Reize assoziiert. Eine veränderte TPT1/HRF-Expression wurde in unterschiedlichen Krankheitskontexten beschrieben, darunter in der Krebsbiologie und bei immunvermittelten Entzündungen, wo sie mit Proliferation, Migration und zytokinassoziierten Phänotypen korrelieren kann. Diese Eigenschaften machen TPT1 zu einem nützlichen Ziel, um Signalwege zu untersuchen, die Zellschicksalsentscheidungen, Stressantwort-Netzwerke und immunrelevante Signalübertragung in humanen Modellsystemen steuern.
HRF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TPT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TPT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TPT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TPT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.