HRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423518

Übersicht

Maus-Tpt1 kodiert den histaminfreisetzenden Faktor (HRF), auch als „translationally controlled tumor protein“ bekannt, ein konserviertes zytosolisches Protein, das an der Regulation von Zellwachstum, Stressantworten und Überlebenssignalen beteiligt ist. HRF wirkt in Signalwegen mit, die mit der Kalziumhomöostase, der Kontrolle der Apoptose sowie der Modulation entzündlicher Prozesse und der Funktionen von Immunzellen verknüpft sind; zudem wurden Rollen bei der Zytokinfreisetzung und in Programmen der zellulären Aktivierung beschrieben. Eine veränderte HRF/TPT1-Aktivität wurde mit fehlregulierter Entzündung und Immun-Signalübertragung sowie mit abnormen proliferativen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Onkologie und Gewebe-Remodelling relevant sind. Diese Eigenschaften machen Tpt1 zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der Stressanpassung, Immunregulation und Entscheidungen über das Zellschicksal in Mausmodellsystemen zu untersuchen.

Das HRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpt1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpt1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpt1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HRF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpt1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HRF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpt1-Exone abzielen, die für die HRF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpt1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpt1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HRF HDR-Plasmid (m) und HRF HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpt1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpt1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.