Plasmide CRISPR d'Activation (h) HRASLS2: sc-412404-ACT

HRASLS2 (HRAS-like suppressor 2), également appelé H-rev107-3, code une enzyme associée à la membrane présentant des activités de phospholipase A1/2 et d’acyltransférase, qui remodèle la composition des phospholipides et influence la signalisation médiée par les lipides. En régulant la libération des acides gras et le renouvellement des phospholipides, HRASLS2 peut affecter la dynamique membranaire, le trafic vésiculaire et les réponses cellulaires liées au contrôle de la croissance et à la différenciation. Des modifications de l’expression de HRASLS2 ont été étudiées dans le contexte des réseaux de signalisation oncogénique et de la reprogrammation du métabolisme lipidique, où des perturbations de l’homéostasie des lipides membranaires peuvent moduler les voies de prolifération et de réponse au stress. Son lien fonctionnel avec des phénotypes cellulaires associés à Ras en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie tumorale, en métabolisme et sur les transitions d’état cellulaire.

HRASLS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HRASLS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HRASLS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HRASLS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HRASLS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HRASLS2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HRASLS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HRASLS2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HRASLS2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HRASLS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.