HPS-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407496

Übersicht

HPS6 kodiert HPS-6, eine zentrale Komponente des Komplexes „biogenesis of lysosome-related organelles complex 2“ (BLOC-2), der die Fracht-Sortierung und den vesikulären Transport zu spezialisierten Organellen wie Melanosomen und dichten Granula in Thrombozyten reguliert. Über seine Rolle im endosomalen Transport und in der Organellenreifung beeinflusst HPS-6 die Proteinlokalisation, die Membrandynamik und intrazelluläre Transportwege, die mit lysosomalen Funktionen verknüpft sind. Störungen von HPS6 sind mit dem Hermansky–Pudlak-Syndrom Typ 6 assoziiert, einer Erkrankung, die durch Defekte in lysosomenverwandten Organellen sowie veränderte, mit Pigmentierung und Hämostase zusammenhängende zelluläre Phänotypen gekennzeichnet ist. HPS6-Loss-of-Function-Modelle werden eingesetzt, um Mechanismen der Organellenbiogenese, der Frachtzustellung und zelltypspezifischer Transportprogramme in relevanten menschlichen Zellsystemen zu untersuchen.

Das HPS-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HPS6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HPS6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HPS6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HPS-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HPS6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HPS-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HPS6-Exone abzielen, die für die HPS-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HPS6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HPS-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HPS-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HPS6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HPS-6 HDR-Plasmid (h) und HPS-6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HPS6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HPS6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.