Plasmide CRISPR d'Activation (h) HPRG: sc-404772-ACT

La glycoprotéine riche en histidine (HPRG), codée par le gène humain *HRG*, est une protéine plasmatique sécrétée qui se lie à l’héparine, au plasminogène, au fibrin(ogène) et à des ions métalliques divalents afin de moduler les interactions avec la matrice extracellulaire et l’équilibre protéolytique. Par ces interactions, l’HPRG influence la dynamique de la coagulation et de la fibrinolyse, la signalisation angiogénique et des processus de l’immunité innée, notamment le comportement des neutrophiles et l’élimination des débris cellulaires. L’expression de *HRG* et les concentrations circulantes d’HPRG ont été étudiées comme variables associées aux états inflammatoires et à la biologie vasculaire, avec des implications pour l’interprétation de phénotypes liés à l’hémostase et à l’immunité. En tant que protéine multifonctionnelle de liaison à des ligands, l’HPRG est fréquemment étudiée dans des voies reliant la thrombo-inflammation, le remodelage de la matrice et la signalisation des glycosaminoglycanes de surface cellulaire.

HPRG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HRG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HPRG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HRG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HRG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HPRG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HRG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HPRG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HPRG dans les cellules tumorales présentant une expression de HRG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.