Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO HPK1 (h): sc-402367
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HPK1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HPK1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HPK1 Antibody (G-9): sc-374183
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HPK1 (h) | sc-402367 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
MAP4K1 code la kinase 1 des progéniteurs hématopoïétiques (HPK1), une sérine/thréonine kinase de la famille Ste20 exprimée majoritairement dans les cellules immunitaires et située en amont de la signalisation MAPK. HPK1 agit comme un régulateur négatif de la signalisation des récepteurs d’antigène en modulant les complexes adaptateurs proximaux et en façonnant l’activation en aval de JNK/p38, influençant ainsi les sorties de signalisation du récepteur des cellules T (TCR) et du récepteur des cellules B (BCR). Par ces fonctions, HPK1 affecte les seuils d’activation des lymphocytes, la production de cytokines et la dynamique de la synapse immunologique. Une activité dérégulée de MAP4K1/HPK1 a été associée à une homéostasie immunitaire altérée et a été étudiée dans des contextes d’inflammation à médiation immunitaire et d’immunologie tumorale comme modulateur des réponses immunitaires antitumorales.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HPK1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAP4K1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAP4K1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAP4K1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HPK1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAP4K1 pour l'étude de la signalisation de HPK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de MAP4K1 essentiels à la fonction de HPK1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAP4K1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HPK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HPK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAP4K1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HPK1 plasmide HDR (h) et le HPK1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAP4K1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAP4K1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.