HoxD9 Double Nickase Plasmid (h): sc-404606-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HoxD9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HoxD9 Double-Nickase-Plasmid (h) und HoxD9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HOXD9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HoxD9: sc-137134
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HoxD9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxD9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXD9 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxD9, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der während der embryonalen Entwicklung zur Etablierung der anterior-posterioren Musterbildung und der Positionsidentität beiträgt. Als Bestandteil regulatorischer Netzwerke der HOX-Gene moduliert HoxD9 Transkriptionsprogramme, die Differenzierung, Morphogenese und Zellschicksalsentscheidungen steuern, und ist dabei in chromatinvermittelte Kontrollmechanismen sowie entwicklungsbiologische Signalwege eingebunden. Eine fehlregulierte HOXD9-Expression und eine veränderte Aktivität des HOX-Programms wurden mit Veränderungen der Linienfestlegung und der Proliferationsprogramme in verschiedenen Krebskontexten sowie anderen Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen HOXD9 zu einem nützlichen Ziel, um die Architektur transkriptioneller Schaltkreise, die Enhancer-Promotor-Logik und Mechanismen der Fehl-/Fehlexpression entwicklungsrelevanter Gene in menschlichen Zellen zu untersuchen.
HoxD9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HOXD9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HOXD9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HOXD9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HOXD9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.