Plásmido Doble Nickase (h) HoxD3: sc-405920-NIC

HOXD3 codifica el factor de transcripción homeobox humano HoxD3, un regulador de unión al ADN que contribuye al patrón anteroposterior y a la identidad posicional durante el desarrollo. Mediante un control transcripcional específico de secuencia, HoxD3 influye en programas vinculados a la morfogénesis, la migración celular y la especificación de linajes, integrándose en redes génicas del desarrollo más amplias reguladas por HOX. La expresión desregulada de HOXD3 se ha asociado con estados de diferenciación alterados y con fenotipos invasivos o angiogénicos aberrantes descritos en múltiples contextos de biología tumoral, lo que lo hace relevante para estudiar la circuitería transcripcional en la plasticidad celular asociada a enfermedad. Como factor de transcripción nuclear, HoxD3 se investiga con frecuencia por sus dianas aguas abajo, su regulación dependiente de la cromatina y sus efectos específicos del contexto sobre decisiones del destino celular.

HoxD3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HOXD3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HOXD3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HOXD3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HOXD3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.