Plásmido CRISPR de Activación (h) HoxC6: sc-403393-ACT

HOXC6 codifica el factor de transcripción homeobox humano HoxC6, un regulador de unión al ADN que ayuda a establecer el patrón anteroposterior y las decisiones de destino celular durante el desarrollo embrionario. En tejidos diferenciados, HOXC6 contribuye a programas transcripcionales que controlan la proliferación, la migración y la diferenciación epitelial mediante interacciones dependientes del contexto con cofactores que modulan la cromatina y la actividad de los potenciadores. Se ha descrito una expresión desregulada de HOXC6 en múltiples tipos de tumores y con frecuencia se estudia por su papel en la plasticidad de linaje, la expresión génica asociada a la invasión y estados de diferenciación alterados. Como regulador del desarrollo con un amplio alcance transcripcional, HOXC6 es relevante para la investigación sobre morfogénesis, redes transcripcionales oncogénicas y circuitería reguladora génica.

HoxC6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOXC6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxC6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOXC6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOXC6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxC6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOXC6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxC6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxC6 en células tumorales con expresión de HOXC6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.