HoxB5 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420914-ACT

Hoxb5 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxB5, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der die anterior‑posteriore Achse strukturiert und während der Embryogenese die regionale Identität steuert. In der Maus trägt HoxB5 dazu bei, entwicklungsbezogene genregulatorische Netzwerke zu koordinieren, die die Festlegung von Vorläuferzellen, das Timing der Differenzierung und die Gewebemorphogenese kontrollieren, und ist dabei in übergeordnete Programme des HOX-Clusters sowie in eine chromatinvermittelte Transkriptionskontrolle eingebunden. Seine Aktivität beeinflusst Signalwege der Organogenese sowie hämatopoetische und neuralleistenassoziierte Prozesse; veränderte HOX-Expression wird häufig im Zusammenhang mit gestörter Differenzierung und proliferativen Zuständen untersucht. Da HOX-Faktoren in regulatorischen Hierarchien sehr weit oben angesiedelt sind, wird Hoxb5 häufig genutzt, um entwicklungsbiologische Transkriptionsschaltkreise und Mechanismen der Linienprogrammierung zu untersuchen, die für Krankheitsmodelle relevant sind.

HoxB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hoxb5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hoxb5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hoxb5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxB5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hoxb5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxB5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxB5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hoxb5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.