HoxB4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404013-ACT

HOXB4 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxB4, einen DNA-bindenden Regulator, der während der Embryonalentwicklung Programme der anterior–posterioren Musterbildung steuert und zur Aufrechterhaltung linienspezifizierender transkriptioneller Netzwerke in hämatopoetischen und anderen Vorläuferpopulationen beiträgt. Als Teil der regulatorischen HOX-Gen-Schaltkreise beeinflusst HoxB4 den Chromatinzustand und die koordinierte Expression von Genen für Differenzierung und Selbsterneuerung und greift in Signalwege ein, die Stammzellschicksalsentscheidungen und das Entwicklungs-Timing steuern. Eine dysregulierte HOXB4-Expression sowie eine veränderte Aktivität des HOX-Clusters wurden bei mehreren Malignomen beschrieben, darunter hämatologische Krebserkrankungen, bei denen aberrante entwicklungsbezogene Transkriptionsprogramme zu gestörter Differenzierung und proliferativen Signalen beitragen können. Diese Eigenschaften machen HOXB4 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Entwicklungs-Genkontrolle, epigenetische Regulation und onkogene transkriptionelle Reprogrammierung in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

HoxB4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXB4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxB4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXB4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXB4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxB4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXB4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxB4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxB4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXB4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.