Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxB2: sc-404533-ACT

HOXB2 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB2, un régulateur se liant à l’ADN qui contribue à établir la polarité antéro-postérieure et l’identité segmentaire au cours du développement embryonnaire, en particulier dans le rhombencéphale et les lignées issues de la crête neurale. HoxB2 module des programmes d’expression génique qui contrôlent la spécification du destin cellulaire, la différenciation et la réponse aux morphogènes, via les réseaux transcriptionnels HOX et des interactions avec des cofacteurs tels que PBX et MEIS. Une expression dérégulée de HOXB2 a été associée à une altération des signaux développementaux et à des états transcriptionnels aberrants dans des contextes pathologiques humains, notamment dans des cancers où les programmes géniques HOX peuvent influencer la prolifération, la migration et la plasticité de lignée. En tant que régulateur transcriptionnel, HoxB2 constitue un nœud accessible pour étudier les circuits de régulation génique et la réactivation de voies développementales dans des systèmes modèles.

HoxB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxB2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxB2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxB2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.