HoxB13 Double Nickase Plasmid (h): sc-401878-NIC

HOXB13 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxB13, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der zur Etablierung der anterior-posterioren Musterbildung beiträgt und Differenzierungsprogramme in urogenitalen und Prostata-Linien steuert. Durch die Modulation transkriptioneller Netzwerke nachgeschalteter Entwicklungs-Signalwege beeinflusst HoxB13 Zellschicksalsentscheidungen, die Reifung des Epithels und gewebespezifische Genexpression. Eine fehlregulierte HOXB13-Aktivität und veränderte transkriptionelle Schaltkreise wurden mit der Prostatabiologie und onkogenem Reprogramming in Verbindung gebracht, was HOXB13 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von Linienplastizität und tumorassoziierten genregulatorischen Zuständen macht. In der biomedizinischen Forschung wird HOXB13 häufig hinsichtlich seiner Rollen in der Transkriptionskontrolle, chromatinabhängigen Regulation und kontextabhängigen Effekten auf Proliferation und Differenzierung untersucht.

HoxB13 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HOXB13-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HOXB13 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HOXB13-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HOXB13-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.