HoxA5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402499-ACT

HOXA5 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxA5, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der während der menschlichen Entwicklung zur Festlegung des anterior-posterioren Musterungsplans und der Segmentidentität beiträgt. In differenzierten Geweben unterstützt HoxA5 Programme, die die Festlegung von Zellschicksalen, die epitheliale Differenzierung und die Gewebemorphogenese steuern, indem es gemeinsam mit anderen HOX-Kofaktoren transkriptionelle Netzwerke koordiniert. Eine fehlregulierte HOXA5-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten mit veränderter Proliferation, Invasion und Veränderungen des Linien- bzw. Differenzierungszustands in Verbindung gebracht, was HOXA5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung entwicklungsbedingter Reprogrammierung und transkriptioneller Kontrolle macht. Als Regulator der Genexpression wird HoxA5 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Differenzierung, Umbau der extrazellulären Matrix und kontextabhängiger Wachstumskontrolle verknüpft sind.

HoxA5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxA5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxA5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxA5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxA5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXA5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.